PCR儀校準是實驗中一定要去做的事情，一個穩(wěn)定的溫度循環(huán)是成功實現(xiàn)PCR所必需的。其中溫度控制的動、穩(wěn)態(tài)特性是影響PCR擴增結(jié)果正確與否的重要因素之一, 這包括溫度準確性、升降溫速度、溫場均勻性、大超調(diào)溫度。

　　PCR就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內(nèi)In Vitro的大量合成，基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復制。目前常用的技術(shù)，可以將一段基因復制為原來的一百億至一千億倍。根據(jù)DNA擴增的目的和檢測的標準，可以將PCR儀分為普通PCR儀，梯度PCR儀，原位PCR儀，實時熒光定量PCR儀四類。

　　PCR儀校準的項目有以下幾點：

　　一、溫度準確性

　　溫度準確性是PCR儀重要的性能指標，如溫度準確性低可直接造成非特異性擴增，甚至是錯誤的擴增結(jié)果，造成假陽性和假陰性。

　　市場上各家廠商考核基因擴增儀PCR儀性能的主要指標，一般廠家的企業(yè)指標為±0.5℃，一些性能較好的產(chǎn)品可以實現(xiàn)的溫度準確度為±0.3℃。故需對PCR儀控溫準確度進行測試。校準實驗平均溫度的計算公式為：I—參加檢測的溫度探頭序號；n—參加檢測的溫度探頭的數(shù)量

　　二、溫場均勻性

　　由于PCR儀加熱器加熱不均勻，導致PCR儀模塊上各孔存在一定溫差。造成試驗結(jié)果偏差。一般PCR儀邊緣點的溫度低于中間區(qū)域，所以均勻性為PCR儀重要的性能指標。一般廠家的企業(yè)指標規(guī)定均勻性為±0.5℃，一些性能較好的產(chǎn)品可以實現(xiàn)的溫度均勻度為±0.3℃。

　　校準實驗時，通過選取孔板中16個特殊反應位置來測量溫度，并得出孔板的溫度均勻性。均勻性為各個探頭在同一時刻大溫度與小溫度的差值。均勻度計算公式為：tmax-tmin  tmax =大溫度；tmin =小溫度

　　三、升降溫速率

　　PCR儀校準中擴增產(chǎn)物數(shù)量的多少決定了PCR的效率。為了在短時間內(nèi)獲得盡可能多的產(chǎn)物，需要儀器在升降溫段具有按照預設升降溫速率快速升溫和降溫的能力大升溫速率達15~20℃。一個完整的PCR過程，是由若干個升溫→恒溫→降溫循環(huán)構(gòu)成的。因為“變性”，“退火”和“延伸”3個階段是必須要保證的。

　　因此，只有使升降溫的過程盡可能地迅速，才能縮短每個PCR循環(huán)以及整個PCR 過程所需時間。一般廠家的企業(yè)指標規(guī)定升溫速率為±3℃/sec。儀器校準實驗時，升溫速率為溫度從40℃到90℃的時間；降溫速率為溫度從70℃到35℃的時間。

　　四、大超調(diào)溫度

　　當溫度從一定點溫度調(diào)節(jié)到另一定點溫度,就會產(chǎn)生溫度的超調(diào)。超調(diào)溫度過大同樣會對試驗產(chǎn)生影響，所以校準實驗時，需要計算大超調(diào)溫度和平均超調(diào)溫度。